一、 儀（yí）器介紹（shào）

實驗目的（de）：

本試驗（yàn）檢測受試物是否引起培養的（de）哺乳動（dòng）物細（xì）胞染（rǎn）色體畸變,以（yǐ）評價受試物致突（tū）變的可能性

實驗概述：

在加入和不加入代謝活化係統的條件下,使（shǐ）培養的哺乳動物細胞暴露於受試物中。用中期（qī）分裂相阻斷（duàn）劑（如秋水仙素或秋水（shuǐ）仙胺）處理,使細胞停止在中（zhōng）期（qī）分裂相,隨（suí）後收獲細（xì）胞,製片,染色,分析染色體畸變。

大（dà）部分的致突變劑導致染色（sè）單體型畸變,偶有染（rǎn）色體型畸變（biàn）發生。雖然多（duō）倍體的增加可能預示著有染色體數目畸變的可能,但本方法並（bìng）不適合用於測定染色體的數目（mù）畸變。

應用範（fàn）圍

應用於（yú）科研、農業、衛（wèi）生、教育、霧霾狀態可吸入顆粒染毒效果研究等（děng）各個領域

符合標準：

GB/T 15670.19-2017《農藥登記毒理學試驗方法第19部分:體（tǐ）外哺乳（rǔ）動（dòng）物細胞（bāo）染（rǎn）色體

畸變試驗》

二、試驗流（liú）程

1）細胞培（péi）養

選擇合適細胞係，在含血清培養基中培養至（zhì）對數生長期。

2）受試物處（chù）理

設置多個濃度組（需包括細胞毒性評估，如50%生長抑製濃度）

陽性對照（如絲裂黴素C、環磷酰胺等已知誘變劑）

陰性對照（溶劑對（duì）照）

3.）代謝活化係統（S9混合（hé）液）

模擬體內代謝，用於檢測需代謝（xiè）激（jī）活的致突變（biàn）物（如加Aroclor 1254誘導（dǎo）的大鼠肝S9）

4.）采樣時間（jiān）

短期處理:1個（gè）細（xì）胞周期（通（tōng）常24小時，含（hán）或不含S9）

長期處理:覆蓋多個（gè）細胞周期（如48小時）

5）染色體製備

秋水仙素（或秋水仙（xiān）胺）處理:阻斷中期細胞。

低滲處理（KCI溶液）使細胞膨脹。

固定（甲醇（chún）:冰醋酸=3:1）後滴片，Giemsa染色。

6）鏡檢分析

顯微鏡下觀察（chá）至（zhì）少200個（gè）中期（qī）分裂相，記錄畸變類型和頻率（lǜ）。

三、儀器與試劑

關鍵儀器：

培養箱、生物安全櫃、離心機、顯微鏡（配備油鏡和圖像分析係（xì）統）

染色體自動掃描儀（可選）

主要試劑:

細胞培養基、胎牛血清（qīng）、胰（yí）蛋白酶。

秋水仙素、Giemsa染液、S9混合液。