一、 儀器介紹

實驗目的：

確定重（chóng）複接觸受試物對哺乳動物是否（fǒu）可引起皮膚變態反應及其程度

試驗概述：  

部封閉塗皮試驗（Buehler test，BT）和（hé）豚（tún）鼠值試驗（uinea pig maximisation test，GPMT）是實驗動物通過多次皮膚塗抹（誘導接觸）或皮內注射受試物10d~14d（誘導（dǎo）階段）後,給予激發（fā）劑量的受試物,觀察實驗動物,並與對照動（dòng）物比較對激發接觸受試（shì）物的皮膚反（fǎn）應強度（dù）。

小鼠部（bù）淋巴結分析（xī）試驗（locallymph node assay，LLNA）是通過耳部給予（yǔ）實驗動物受試物,引（yǐn）起（qǐ）淋巴結的淋巴細胞增生,淋巴細胞（bāo）增生與受試物劑（jì）量（過敏程度）成比例。利（lì）用放射性標記方法,測定試驗組（zǔ）與（yǔ）對照組淋巴細胞的標記率,並進行對比,獲得（dé）刺激指（zhǐ）數,評價致敏強度。

應用範（fàn）圍

應用於科研、農（nóng）業、衛生、教育、霧霾狀態可吸入顆粒染毒效果研究等各個領域

符合標準：

GB/T 15670.9-2017《農藥登記毒理學試驗方法第9部分（fèn）皮膚（fū）變態反應（致（zhì）敏）試驗》

二、試驗步驟:

1. Buehler Test（BT） 

動物模型:豚鼠

操作步驟:

誘導階段:通過封閉式皮膚塗抹受試物，持續10-14天。激發階段:間隔後再次塗抹受試物，觀察皮膚反應。

觀（guān）察指標:紅斑、水腫等皮膚（fū）炎症反應的強度(主觀評分)

優點:

模擬人類皮膚接觸（chù）途徑，適用於部製劑(如化妝品、外用藥物)

無需注射，操作相對溫和。0

缺（quē）點:

敏感性較低，可（kě）能漏檢弱致敏物，。依賴主觀評分，存在實驗者偏差。0應用場景:傳統化妝品、外用藥（yào）品的安全性評估。

2.豚鼠值試（shì）驗（GPMT）

動物模型:豚鼠

操作步（bù）驟:

誘導階段:皮內注射受試物（常聯（lián）合弗氏完全佐劑）結合皮（pí）膚塗抹，持續10-14天。

激發階段:再次塗抹受試物，評估皮膚反應。

觀察指標:與BT類似，但反應更強烈(紅斑、水腫、硬結)

優點:

敏感（gǎn）性高，可（kě）檢（jiǎn）測強致敏物和弱致敏物;

國際的“金（jīn）標（biāo）準”，尤其（qí）適用於化學品和工業原料。

缺點:

使用佐劑可能引發過度免疫反（fǎn）應，導致假陽性（xìng）;

動物痛苦程度較高，倫理爭（zhēng）議（yì）較（jiào）大。

應用場景:工業化學品、強致敏性物質(如染發劑、橡膠添加劑)的嚴格檢測。

3.小（xiǎo）鼠部淋巴結試驗（yàn）（LLNA）

動物模型:小鼠.

操（cāo）作步驟:

誘導（dǎo）階段:連續3天耳部塗抹受試物。

檢測指標:通過3H-胸（xiōng）苷或BrdU標記增殖的淋巴（bā）細胞，計算刺（cì）激指數（SI）觀察指（zhǐ）標:淋巴結淋巴（bā）細胞增殖（zhí）程度（SI>3判為陽性）

優點:

客觀定量:減少主觀評分誤（wù）差（chà）；

符合3R原則:動物用量少，無需激發（fā）階段，痛苦小;

高效快（kuài）速:試驗周期短(約（yuē）1周)。

缺點:

對某些物質(如金屬鹽)敏感性不足，需使用放射（shè）性物質或特殊設備（bèi），成本較高。

應用場景:歐盟等法規優（yōu）先的替代方法，廣泛用（yòng）於藥品（pǐn）、化（huà）妝品及化工產品的初篩。