一、 儀器介紹

實驗目的：

本試驗用於檢（jiǎn）測受試物對體外培養的哺乳動物細（xì）胞的基（jī）因突變作用,包括堿基對突變、移碼突（tū）變和缺失等,從而評價受試物引起突變的可能（néng）性

實驗概（gài）述：

本試驗屬正向突變試驗,可檢出堿基置換型致突變物和移碼型致突變物（wù）。在（zài）加入和不加入代謝活化係統的條件下,使細胞暴（bào）露於受（shòu）試物一定時間,然後將細胞傳代培養。胸苷激酶水平正常的細胞對三（sān）氟胸苷（trifluorothymidine,TFT）等敏感,因而在培養液中不能（néng）生長分裂,突變細（xì）胞則不敏感,在含有三氟胸苷的（de）選擇性培養液中能繼（jì）續分裂並形成集落。相似的,次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖（táng）基酶(HPRT)正常的細（xì）胞對 6-硫代鳥嘌呤（6-thioguanine,6-TG）敏感,突變的細胞則不敏感,在含有 6-硫代鳥嘌（piào）呤的選擇性培養液中可生長形成集落。基於突變集落數,計算突變頻率以評價受試物的致突（tū）變性。

應用（yòng）範圍

應用於科研、農（nóng）業、衛生、教育、霧霾狀（zhuàng）態（tài）可吸入顆粒染（rǎn）毒效果研究等（děng）各個領域

符合標準：

GB/T 15670.20-2017《農藥登記毒理學試驗（yàn）方法（fǎ）第20部分:體外哺乳動物細胞基因突變試驗（yàn）》

二、試驗流程

1）細胞培養:

選擇合適細胞係（如L5178Y、CHO），常（cháng）規傳代（dài）培養

2）受試物處（chù）理:

暴露於不同濃度受試物（需設陰性/陽性對照）

3）表達（dá）期:

預留足夠時間（通常7-10天）使（shǐ）突（tū）變表型顯現。

4.）突變（biàn）體篩選:

TK試驗:使用三氟胸苷（TFT）篩選TK突變體。

HPRT試驗:使用6-硫代鳥嘌呤（6-TG）選HPRT突變體。

5）克（kè）隆形成分析:

計數突變集（jí）落，計算突變頻率（突變集落數/存活細胞數）

6）數據統計:

與對照組比（bǐ）較，判斷突（tū）變率是否（fǒu）顯著（zhe）增加。

三、注意事項

1）細胞活力控製:受試物濃（nóng）度需保證細胞存活率（通（tōng）常（cháng）>50%）

2）代謝活化係統:需加入S9混（hún）合物(模擬體內代（dài）謝，（如Aroclor 1254誘導（dǎo）的大鼠肝S9）。

3）假陽性/陰性:避免pH、滲（shèn）透壓等非特異性因素幹擾。

4）合規性:   遵循國際指南（如OECD 490、ICH S2R1）。

計算：